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細胞培養的注意事項

更新時間:2022-01-06點擊次數:646

提供:上海安研生物試劑銷售網  : 

1.如何選用培養基?

培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞,很可能在DMEMM199中同樣很容易生長??傊?,MEM做粘附細胞培養、RPMI-1640做懸浮細胞培養,各種目的無血清培養的是AIM V培養基(SFM)。在開始進行新的細胞培養時,可以參考下表所列的條件:

細胞系 細胞類型 種 組織 推薦使用的培養基

293 成纖維細胞 人 胚胎腎 MEM, 10% 熱滅活馬血清

3T6 成纖維細胞 小鼠 胚胎 DMEM, 10% 胎牛血清

A549 上皮細胞 人 肺癌 F-12K, 10%胎牛血清

A431     上皮型           表皮細胞癌     DMEM, 10% 胎牛血清

A9 成纖維細胞 小鼠 結締組織 DMEM, 10%胎牛血清

AtT-20 上皮細胞 小鼠 垂體腫瘤 F-10, 15% 馬血清和2.5% 胎牛血清

BALB/3T3 成纖維細胞 小鼠 胚胎 DMEM, 10% 胎牛血清

BHK-21 成纖維細胞 倉鼠 腎 GMEM, 10% 胎牛血清 或MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA

BHL-100 上皮細胞 人 乳房 McCoy', 10% 胎牛血清

BeWo     上皮滋養層        絨毛癌      F-12K, 15%胎牛血清

BT 成纖維細胞 牛 鼻甲骨細胞 MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAA

Caco-2 上皮細胞 人 結腸腺癌 MEM, 20% 胎牛血清 和NEAA

Chang 上皮細胞 人 肝臟 BME, 10% 小牛血清

CHO-K1 上皮細胞 倉鼠 卵巢 F-12, 10% 胎牛血清

Clone 9 上皮細胞 大鼠 肝臟 F-12K, 10% 胎牛血清

Clone M-3 上皮細胞 小鼠 黑素瘤 F-10, 15% 馬血清和 2.5% 胎牛血清

COS-1 成纖維細胞 猴 腎 DMEM, 10% 胎牛血清

COS-3 成纖維細胞 猴 腎 DMEM, 10% 胎牛血清

COS-7 成纖維細胞 猴 腎 DMEM, 10% 胎牛血清

CRFK 上皮細胞 貓 腎 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA

CV-1 成纖維細胞 猴 腎 MEM, 10% 胎牛血清

D-17 上皮細胞 狗 骨肉瘤 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA

Daudi 成淋巴細胞 人 淋巴瘤病人血液 RPMI-1640, 10% 胎牛血清

GH1 上皮細胞 大鼠 垂體腫瘤 F-10, 15% 馬血清和 2.5% , 胎牛血清

GH3 上皮細胞 大鼠 垂體腫瘤 F-10, 15% 馬血清和2.5% 胎牛血清

H9 成淋巴細胞 人 T細胞淋巴瘤 RPMI-1640, 20% 胎牛血清

HaK 上皮細胞 倉鼠 腎 BME, 10% 小牛血清

HCT-15 上皮細胞 人 結腸直腸腺癌 RPMI-1640, 10% 胎牛血清

HeLa 上皮細胞 人 子宮頸癌 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA (in suspension, S-MEM)

HEp-2 上皮細胞 人 喉 癌 MEM, 10% 胎牛血清

HL-60 成淋巴細胞 人 早幼粒細胞白血病 RPMI-1640, 20% 胎牛血清

HT-1080 上皮細胞 人 纖維肉瘤 MEM, 10% HI 胎牛血清 和NEAA

HT-29 上皮細胞 人 結腸腺癌 McCoy's , 10% 胎牛血清

HUVEC 內皮細胞 人 臍帶 F-12K, 10% 胎牛血清 和 肝素鹽 100 ug/ ml

I-10 上皮細胞 小鼠 睪丸癌 F-10, 15% 馬血清和 2.5% 胎牛血清

IM-9 成淋巴細胞 人 骨髓瘤病人骨髓 RPMI-1640, 10% 胎牛血清

JEG-2 上皮細胞 人 絨毛膜癌 MEM, 10% 胎牛血清

Jensen 成纖維細胞 大鼠 肉瘤 McCoy's , 5% 胎牛血清

Jurkat 成淋巴細胞 人 淋巴瘤 RPMI-1640, 10% 胎牛血清

K-562 成淋巴細胞 人 骨髓性的白血病 RPMI-1640, 10% 胎牛血清

KB 上皮細胞 人 口腔癌 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA

KG-1 骨髓白細胞 人 紅白血病病人骨髓 IMDM, 20% 胎牛血清

L2 上皮細胞 大鼠 肺 F-12K, 10%胎牛血清

L6 大鼠 骨骼肌成肌細胞 DMEM, 10% 胎牛血清

LLC-WRC 256 上皮細胞 大鼠 癌 Medium 199, 5% 馬血清

McCoy 成纖維細胞 小鼠 未知 MEM, 10% 胎牛血清

MCF7 上皮細胞 人 乳腺癌 MEM, 10% 胎牛血清 NEAA, 10ug/ml 胰島素

WEHI-3b 類巨噬細胞 小鼠 骨髓單核細胞白血病 DMEM, 10% 胎牛血清

WI-38 上皮細胞 人 胚胎肺 BME, 10% 胎牛血清

WISH 上皮細胞 人 羊膜 BME, 10% 胎牛血清

WS1 人 胚胎皮膚 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA

XC 上皮細胞 大鼠 肉瘤 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA

Y-1 上皮細胞 小鼠 腎上腺瘤 F-10, 15% 馬血清和 2.5% 胎牛血清

2.為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在進行免疫學研究、培養ES細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。

3.L-谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎?它在溶液中不穩定嗎?

L-谷氨酰胺在細胞培養時是重要的。脫掉氨基后,L-谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經過一段時間后會降解,但是確切的降解率一直沒有zui終確定。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成,而氨對于一些細胞具有毒性。

4.GlutaMAX-I是什么?培養細胞如何利用GlutaMAX-I?這個二肽有多穩定?

GlutaMAX-I二肽是L-谷氨酰胺的衍生物,將其不穩定的α-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用。

GlutaMAX-I二肽非常穩定,即使在121滅菌20分鐘,GlutaMAX-I二肽溶液有zui小的降解,如果在相同條件下,L-谷氨酰胺幾乎*降解。

5.為什么培養基中可以省去加酚紅?

酚紅在培養基中被用來作為PH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用(特別是雌激素)。為避免固醇類反應,培養細胞,尤其是哺乳類細胞時,用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時,不使用加有酚紅的培養基。

6.如何用臺盼蘭計數活細胞?

用無血清培養基把細胞懸液稀釋到2002000/毫升,在0.1毫升的細胞中加入0.1毫升的0.4%的臺盼蘭溶液。輕輕混勻,數分鐘后,用血球計數板計數細胞?;罴毎懦馀_盼蘭,因而染成藍色的細胞是死細胞。

7.如何消除組織培養的污染?

當重要的培養污染時,研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母,把污染細胞與其它細胞系隔離開,用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺,檢查HEPA過濾器。

高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性,因而,做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實驗步驟。

1.在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞,稀釋到常規細胞傳代的濃度。

2.分散細胞懸液到多孔培養板中,或幾個小培養瓶中。在一個濃度梯度范圍內,把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,兩性霉素B推薦下列濃度,0.25,0.501.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml

3.每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現空泡,匯合度下降和變圓。

4.確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度23倍濃度的抗生素的培養液培養細胞23代。

5.在無抗生素的培養基中培養細胞一代。

6.重復步驟4。

7.在無抗生素的培養基中培養46代,確定污染是否以已被消除。

8.培養基中丙酮酸鈉的作用是什么?

丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源。盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是,如果沒有葡萄糖的話,細胞也可以代謝丙酮酸鈉。

9.為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現沉淀?

GIBICO的胎牛血清 沒有預老化,儲存在28時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在-20儲存胎牛血清,避免反復凍融。

10.目錄上說,Hank’s 平衡鹽溶液(HBS)要在空氣中使用,不需要CO2培養箱。原因是什么?

Hank’s 平衡鹽溶液(HBS)和Earle’s平衡鹽溶液(EBS)有什么本質的功能差別?
HBS
EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,碳酸氫鈉的含量在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,以維持溶液的PH值。Eagles液在空氣水平的CO2 中,溶液會變堿,Hanks液在CO2培養箱中會變酸。如果希望在CO2培養箱中保存組織,需要用Eagles液。如果僅僅是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織,用Hanks液就可以了。

11.Qualified Certified 胎牛血清有什么差別?

Certified 胎牛血清包括了Qualified 胎牛血清執行的所有的標準檢驗程序,而且除了這些標準檢測,Certified胎牛血清還有如下一些附加的檢測:

End-Point Determination of Endotoxin Content

噬菌體檢驗

生物化學檢測

激素的檢測

血紅蛋白檢測

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